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支原體檢測試劑盒

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

支原體檢測試劑盒:
(1)僅需1μl培養細胞上清液和1臺水浴鍋,不需要提取基因組DNA,不需要熒光顯微鏡、PCR儀、電泳儀、凝膠成像儀、生物發(fā)光檢測儀等復雜實(shí)驗設備;
(2)僅需1h出結果,簡(jiǎn)單快速靈敏的細胞支原體檢測方法;
(3)僅需一步操作完成整個(gè)實(shí)驗,實(shí)驗結果根據反應液顏色變化肉眼直觀(guān)容易辨別,無(wú)需電泳,避免多步操作開(kāi)蓋帶來(lái)的假陽(yáng)性 風(fēng)險;
(4)靈敏度遠遠高于PCR法,能夠

產(chǎn)品型號:
更新時(shí)間:2024-06-13
廠(chǎng)商性質(zhì):生產(chǎn)廠(chǎng)家
訪(fǎng)問(wèn)量:7778

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品牌其他品牌貨號MY1000-1-25T/MY1000-2-50T
供貨周期現貨應用領(lǐng)域醫療衛生,食品,生物產(chǎn)業(yè)

一、支原體檢測試劑盒的產(chǎn)品特色:  

(1)僅需1μl培養細胞上清液和1臺水浴鍋,不需要提取基因組DNA,不需要熒光顯微鏡、PCR儀、電泳儀、凝膠成像儀、生物發(fā)光檢測儀等復雜實(shí)驗設備;  

(2)僅需1h出結果,簡(jiǎn)單快速靈敏的細胞支原體檢測方法;  

(3)僅需一步操作完成整個(gè)實(shí)驗,實(shí)驗結果根據反應液顏色變化肉眼直觀(guān)容易辨別,無(wú)需電泳,避免多步操作開(kāi)蓋帶來(lái)的假陽(yáng)性風(fēng)險;  

(4)靈敏度遠遠高于PCR法,能夠檢測細胞培養中常見(jiàn)的多種支原體(豬鼻支原體、jing氨酸支原體、口腔支原體、萊氏無(wú)膽甾原體、發(fā)酵支原體、唾液支原體、人型支原體、梨支原體,占支原體污染的98%)。  


二、支原體檢測試劑盒組成(25T):

組分

規格

溶液A

580μl

溶液B

25μl

陽(yáng)性對照

15μl

石蠟油

700μl

三、實(shí)驗步驟:  

(1)待測細胞培養液上清準備  

待測細胞在培養2-3天且融化度最好達到80%以上時(shí)取細胞培養液200μL以上體積,按照200g離心5分鐘,然后取上清液進(jìn)行后續檢測(不要取到管底部50μl培養液及細胞沉淀即可);  

(2)反應體系配制(首先將溶液A、溶液B、陽(yáng)性對照、石蠟油解凍融化后立即放置于冰上)  

將溶液A從-20℃取出,待其解凍融化后,上下輕輕顛倒混勻。根據待測細胞樣本數量在微量離心管中配制如下反應體系(反應體系配制過(guò)程在冰上進(jìn)行非常重要);

組分

單個(gè)樣品反應體積(μl)

樣品總數

總體積(μl)

溶液A

23μl

N

(N+3)*23

溶液B

1μl

N

(N+3)*1

備注:每次實(shí)驗需要1個(gè)陰性對照、1個(gè)陽(yáng)性對照及由于移液器存在移液誤差,所以檢測N個(gè)樣品一般推薦配制N+3個(gè)上述反應體系  

用震蕩器輕輕混勻,然后分裝到PCR管中(推薦使用200μl體積PCR管),每管分裝24μl上述混勻后的反應液;  

(3)上樣(整個(gè)上樣過(guò)程保持冰上進(jìn)行非常重要,特別是反應液上方覆蓋的石蠟油需要冰上預冷)  

待測樣品:向反應管中加入1μl待測離心后培養液上清,然后用此加液槍上下移動(dòng)輕輕吹打5次;  

陰性對照:不加入任何樣品或加入1μl無(wú)菌水;  

陽(yáng)性對照:加入1μl陽(yáng)性對照樣品,然后用此加液槍上下移動(dòng)輕輕吹打5次;  

然后每反應管溶液上方輕輕中加入25μl石蠟油(水浴鍋中進(jìn)行反應),以防止液體蒸發(fā)導致結果不準確。加入石蠟油時(shí)請注意每次更換槍頭,防止樣品之間交叉污染。如果反應是在PCR儀中進(jìn)行反應,不需要加入石蠟油。  

(4)反應  

將水浴鍋或PCR儀溫度設置成61℃,放入反應管,孵育60min;  

備注:  

1、水浴鍋實(shí)際溫度可能與設置溫度有所偏差,建議先用溫度計進(jìn)行校準。實(shí)際上59-63℃反應都可以進(jìn)行,但會(huì )影響檢測靈敏度;  

2、反應產(chǎn)物不可開(kāi)蓋,否則產(chǎn)生的氣溶膠會(huì )導致后續檢測假陽(yáng)性的出現。建議將反應管包扎在塑料袋或手套中,丟棄到專(zhuān)用垃圾桶中,并及時(shí)清理;  

3、不建議使用烘箱或金屬浴進(jìn)行加熱反應;  

(5)結果判斷  

61℃反應60min后,立刻取出反應管,放于室溫。在光線(xiàn)良好的環(huán)境中觀(guān)察反應結果(建議以白紙為背景)。如果反應液仍為藍紫色,則判定為陰性;若反應液為天藍色,則判定為陽(yáng)性。

四、相關(guān)文獻  

1、ShiyuHe,YanzhiHuang,YanlingZhao.AReverseTranscription-PolymeraseSpiralReaction(RT-PSR)-BasedRapidCoxsackievirusA16DetectionMethodandItsApplicationintheClinicalDiagnosisofHand,Foot,andMouthDisease.FrontiersinMicrobiology.2020;12(11):734-743.  

2、AudreyJean,FlorenceTardy,OmranAllatif.AssessingmycoplasmacontaminationofcellculturesbyqPCRusingasetofuniversalprimerpairstargetinga1.5kbfragmentof16SrRNAgenes.PLOSONE.2017;12(2):e0172358.  

3、ZohreSoheily,MohammadSoleimani,KeivanMajidzadeh-Ardebili.DetectionofMycoplasmaContaminationofCellCulturebyALoop-MediatedIsothermalAmplifcationMethod.CellJ.2019;21(1):43-48.  

4、XinXu,XueyuWang,WenHu.AnImprovedPolymeraseCross-LinkingSpiralReactionAssayforRapidDiagnosticofCanineParvovirus2Infection.FrontiersinVeterinaryScience.2020;7(57):1629-1636.

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