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密度梯度離心法分離小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞的步驟

更新時(shí)間:2022-11-17點(diǎn)擊次數:1087
  小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSC)分離自骨髓。在骨髓中,BMSC占骨髓有核細胞總數的0.001%-0.1%,含量極低。骨髓間充質(zhì)干細胞的體外培養條件要求較高,在培養過(guò)程中,受貼壁時(shí)間、種植密度、血清含量、培養溫度和培養基pH值等條件的影響。
  
  目前用于分離BMSCs的方法主要有五種,分別是貼壁篩選法、骨組織消化法、密度梯度離心法、免疫磁珠分選法和流式細胞儀分離法。
  
  密度梯度離心法是針對骨髓中不同細胞的大小和密度差異進(jìn)行分選,骨髓細胞懸液加入到密度梯度離心液上面,通過(guò)離心使得不同類(lèi)型細胞沉降至其等密度點(diǎn),然后吸取特定位置富集的細胞。
  
  常見(jiàn)的梯度離心液有Ficoll、Ficoll-Paque、percoll、Lymphopre等,具有低粘性和低滲透性的特性,使用密度約為1.077g/mL。
  
  在離心分層時(shí),紅細胞及多核細胞因比重(1.080g/mL)較大而沉降于底部,其次是單個(gè)核細胞(包括BMSCs、造血干細胞、單核細胞等),懸浮密度位于(1.056~1.075)g/mL,血漿及其溶解物懸浮密度位于1.050g/mL。位于分離液之上的灰白色云霧狀層即為單個(gè)核細胞層,在獲取該層細胞后再通過(guò)差速貼壁法去除未貼壁細胞。
  
       使用密度梯度離心法分離小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞效果好,但操作嚴格,不易掌握。 
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