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分離小鼠II型肺泡上皮細胞的知識點(diǎn),了解一下!

更新時(shí)間:2022-09-21點(diǎn)擊次數:1255
  小鼠II型肺泡上皮細胞是肺上皮細胞的重要組成部分,體積小,呈立方體形,覆蓋約5%的肺泡表面,占肺泡上皮細胞的60%,占所有肺細胞的14~15%。
  
  具有合成和分泌表面活性物質(zhì)、參與免疫反應以及轉分化等多種功能,在肺發(fā)育和損傷修復過(guò)程中具有重要作用。
  
  小鼠II型肺泡上皮細胞的分離
  
  雌雄鼠按2:1合籠交配,次日清晨檢查雌鼠陰道有無(wú)陰栓,有陰栓者確定為妊娠。孕D19(預產(chǎn)期為D22)時(shí),在無(wú)菌條件下,剖宮取出胎鼠。
  
  將胎鼠移入超凈臺,從胸部橫斷胎鼠,小心取出雙肺置于預冷的PBS液中,盡可能除凈殘留的氣管組織和結締組織等非肺組織,PBS液清洗2~3次,用鋒利眼科剪將肺組織剪為1mm3左右大小的組織碎塊,用0.25%胰酶(含0.01%DnaseⅠ)溶液清洗1次,然后繼續用0.25%胰酶(含0.01%DnaseⅠ)溶液于37℃攪動(dòng)消化10~20min。
  
  用等量10%FBS的DMEM/F12(*培養基)終止消化,200目篩網(wǎng)過(guò)濾后,1500r/min低溫離心5min,去上清,收集沉淀,0.1%Ⅰ型膠原酶37℃,5%CO2孵箱內消化10~20min。
  
  終止消化仍用等量含10%FBS的DMEM/F12,1000r/min離心5min,收集細胞沉淀。
  
  原代培養的小鼠II型肺泡上皮細胞體積較大,形態(tài)較規則,鏡下可見(jiàn)黑色顆粒狀特征性的嗜鋨小體(即板層體),數量不等,細胞膜上有明顯的微絨毛。
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